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高效液相色谱法中的干扰峰是广大色谱工编辑甚为头疼的事情

点击次数:439 发布时间:2022-06-22
  高效液相色谱法中的干扰峰是广大色谱工编辑甚为头疼的事情,下面对高效液相色谱引起干扰峰的因素做一个简单的归纳。
  一、试剂/溶剂
  高效液相色谱法中,常用的试剂主要是有机溶剂、各种盐类及水。有机溶剂一般多为购买的色谱级,所以出现问题的几率较小。但是分装出的有机溶剂,由于多次使用,被污染的概率较大,因此引入干扰峰的几率较高。其次是水,水中的杂质是干扰峰的主要来源之一,这是大家极易忽视的问题。采集波长较低的检测方法,建议使用高品质水,这样可以避免很多因为水质带来的问题。再次是各种盐类,这也是色谱干扰峰的主要来源之一。
  水和无机盐引起的干扰峰,比较快捷的解决方案是安装鬼峰补集柱,这样可以有效的避免此类干扰。如果使用离子对试剂,则需选择不影响离子对试剂的鬼峰补集柱。
  二、器材
  干扰峰来源的第二个方面是流动相配制及样品前处理过程中接触的各种器材。
  首先是流动相配制过程中接触的器材,包括烧杯、玻璃棒、pH计、滤杯、滤膜、流动相瓶等。烧杯、玻璃棒是配制流动相首先接触的器材,因此建议配制流动相的烧杯、玻璃棒专用。滤杯实验人员只要清洗干净一般不会带来污染。需要注意的是,如果过滤含有离子对的流动相,建议增加清洗次数,避免清洗不干净污染后续流动相。因此,对滤杯的清洗应该建立基本的洗涤规程,保证实验人员对使用的器材清洗到位。滤膜也是干扰峰引入源头之一。乙腈经过有机系滤膜过滤后,在梯度洗脱中会引入较大干扰峰。鉴于色谱级试剂厂家已经过膜,且多数仪器都有脱气机,所以笔者建议无需再对甲醇、乙腈等纯有机相过滤。流动相瓶引入干扰峰的现象主要出现在夏季,这是由于夏季温度高,纯水相容易滋生细菌。后续的流动相瓶使用人员清洗不到位,所以导致引入干扰峰。因此流动相瓶的清洗要建立严格的洗涤规程。
  再次样品前处理过程中接触的器材。前处理过程中接触的器材主要包括容量瓶、滤头、注射器及进样瓶。容量瓶的清洗同流动相瓶、过滤装置一样,要建立良好的清洗规程。移液器材以及滤头、注射器,多为塑料制品,其化学惰性较玻璃制品差,因此容易引入干扰峰。
  三、液相系统
  与前两类干扰峰相比,液相系统干扰峰的解决更加困难。液相系统是一个动态过程,所以此类问题解决过程耗费时间长,而且要求实验人员有很高的色谱素养。笔者对此类问题来源主要归结为三类:强保留物质、离子对污染和管路滋生细菌。
  首先是强保留物质的干扰,其主要特征是宽峰。此类问题多数发生在等度洗脱中,梯度洗脱主要出现在高比例有机相处。这是由于强保留物质在当次进样中未洗脱出,在后续进样洗脱出来所致。

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